预约须知——液质
一、运行前准备（开机与系统检查）
环境检查：确保实验室温度、湿度在仪器要求范围内（通常为恒温20-25℃，湿度<70%），电源稳定。
检查流动相：
足量：确保所有溶剂瓶中的溶剂足够完成整个序列分析，避免中途“断粮”。
新鲜：流动相（尤其水相和含缓冲盐的）建议新鲜配制，最好不超过3天，防止微生物生长或性质变化。
脱气：使用前务必对流动相进行充分脱气（在线脱气机或超声处理），消除气泡对泵和色谱柱的影响。
标识清晰：A相、B相、清洗液等必须标识清楚，严防接错管路。
检查废液：确保废液桶有足够空间，避免废液溢出，腐蚀仪器或污染环境。
检查气源：检查氮气等辅助气体的压力是否在正常范围内。气源中断会导致质谱无法正常电离和检测。
检查真空：启动质谱真空系统后，等待真空度达到稳定工作范围（通常需要数小时），期间不要进行任何操作。确认真空泵运行正常，无异响。
系统冲洗与平衡：
在连接色谱柱之前，先用流动相冲洗管路和进样器，确保无杂质和气泡。
连接色谱柱后，使用初始流动相条件，以低流速（如0.1 mL/min）开始冲洗，逐渐增加至分析流速，观察压力是否稳定且在正常范围。
正式进样前，必须让系统（尤其是色谱柱）在初始条件下充分平衡，直到基线平稳。
二、样品制备
严禁“脏”样品：样品必须澄清、无颗粒物。所有样品在进样前必须使用0.22μm的针头式滤膜过滤，这是保护色谱柱和质谱系统的最关键步骤。
避免不挥发物：绝对避免在样品或流动相中使用不挥发的盐类（如磷酸盐、氯化钠）、强酸强碱、表面活性剂（如SDS, Triton X-100）。这些物质会在离子源处沉积，迅速污染离子源，导致灵敏度急剧下降甚至信号消失。
溶剂匹配：样品溶剂的强度应尽量与流动相的初始条件匹配或更弱，否则可能导致峰形变差（峰展宽、分叉）。
浓度适当：避免进样浓度过高，以免污染系统、产生交叉残留（Carryover）或使检测器饱和。如果不确定，从稀释后的样品开始测试。
基质处理：对于生物样本（血浆、尿液、组织等）或复杂基质样品，必须进行有效的预处理，如蛋白沉淀（PPT）、液液萃取（LLE）或固相萃取（SPE），以去除大部分基质干扰物。
三、方法建立与运行中
柱温与流速：设置的流速和柱温需在色谱柱的建议承受范围内。
质谱参数优化：对于新化合物，需要对离子源参数（如喷雾电压、雾化气、干燥气温度和流速等）和质谱参数（如碰撞能量、碎裂电压等）进行优化，以获得最佳灵敏度和信号。
先运行空白和标样：在分析未知样品前，先运行溶剂空白，检查系统洁净度和背景干扰。然后运行标准品，确认保留时间、峰形和响应。
实时监控：
压力监控：密切关注LC泵的压力曲线。压力突然升高可能意味着堵塞；压力突然下降或剧烈波动可能意味着泄漏或气泡。
色谱图监控：观察基线是否平稳，出峰是否正常。
做好记录：详细记录实验日志，包括样品信息、使用方法、运行序列、仪器状态以及任何异常现象，便于日后问题追溯。
四、运行后处理（关机与维护）
色谱柱清洗：分析结束后，不要立即关机。必须用强溶剂（如高比例的乙腈或甲醇）长时间冲洗色谱柱和系统，将样品残留和强保留物质洗出。
色谱柱保存：若长时间不使用，应将色谱柱从仪器上取下，用合适的溶剂（通常是乙腈或甲醇）保存，并拧紧堵头，防止柱内填料干涸。
系统关机顺序：
先关闭LC的检测器（如DAD），然后停止泵的流动相输送。
关闭MS的离子源（停止加热和气体供应）。
通常不建议关闭质谱的真空系统，除非需要长期关机（数周以上）或进行内部维护。频繁开关真空会缩短涡轮分子泵的寿命。
最后关闭软件和电脑。
定期维护：根据使用频率和样品洁净度，定期清洗离子源（毛细管、锥孔等），并按照仪器手册指导进行校准（Tuning & Calibration）以保证质量轴的准确性和灵敏度。
五、核心通用原则
洁净至上：从溶剂、样品瓶、移液器吸头到样品本身，整个分析流程中的每一步都要做到极致洁净。LC-MS对污染极其敏感。
使用LC-MS级溶剂：务必使用LC-MS级别或更高纯度的溶剂和添加剂（如甲酸、乙酸铵），普通HPLC级的试剂可能含有干扰质谱检测的杂质。
循序渐进，耐心细致：LC-MS不是一台“即插即用”的设备。无论是方法开发还是日常分析，都需要耐心和细致，严格遵守操作规程。
先软后硬：遇到问题时，先从软件设置、方法参数、流动相和样品等“软”件着手排查，再考虑硬件故障。